R01是氧气敏感的荧光探针，最大激发波长为 468nm，最大发射波长为 603nm。其荧光通过分子碰撞与氧气反应，由O₂淬灭，在无氧条件下荧光强度更高，反之有氧条件下荧光强度变低，因此荧光信号的量与样品中细胞外O₂的量成反比，从而BBoxiProbe^® R01可被用于监测细胞外氧气消耗的变化。在测定中，耗氧率由荧光信号随时间的变化计算。细胞耗氧量增加，荧光信号的变化率增加；反之，耗氧量减少，荧光信号的变化率降低。

R01与O₂的这种反应是非破坏性且完全可逆的， R01没有细胞毒性，其是化学稳定的，惰性的，水溶性的和细胞不渗透的，不能透过完整的细胞膜。因此还可以同时与糖酵解， 线粒体膜电位JC-1， ROS和细胞ATP 、LDH等检测的试剂结合使用，进行多参数检测。

用R01进行细胞外耗氧检测方法及其简单，不需要适用特殊的仪器设备，只需要荧光酶标仪之类的荧光读板设备即可。可以用于直接，实时分析细胞呼吸和线粒体功能。适用于测量各种全细胞（贴壁和悬浮细胞），透化细胞，各种3D培养物，组织，小生物，球体，支架和基质等。还适用于分离的线粒体，分离的酶，细菌，酵母和霉菌等的细胞外耗氧情况测量。