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线粒体膜通透性转换孔（MPTP）的检测
7072 人阅读发布时间：2018-12-03 08:54
线粒体膜通透性转换孔（mitochondrial permeablity transition pore，mPTP），又称线粒体巨型通道（magachannel），是存在于线粒体内外膜之间的一组蛋白复合体，由多种蛋白质复合组成，是存在于线粒体内外膜之间的一种非特异性高导电性通道，其分子组成尚未完全清楚，多数学者认为其是由外膜的电压依赖的阴离子通道（VDAC）、内膜的腺嘌呤核苷转位蛋白（ANT）以及亲环素 D 等组成。线粒体通透性转换孔（mPTP）可能参与了细胞死亡过程中线粒体成分的释放，在细胞的生存、凋亡中扮演着重要角色，它涉及缺血 / 再灌注、肿瘤、衰老、神经变性等多个领域。
正常的细胞线粒体内膜可维持正常的线粒体电位梯度以保证细胞呼吸作用及能量供应，随着 Ca2+ 的摄入和释放，一种低电导渗透性转换孔在张开和闭合中来回切换。当细胞发生凋亡时和病理性死亡时，线粒体膜电位转换孔渗透性发生改变，Ca2+ 的过载，线粒体谷胱甘肽的氧化，活性氧水平的升高，包括后继细胞色素 C 的释放，线粒体膜电位下降等都会导致线粒体渗透性转换孔的激活。
贝博 TM BBcellProbe® M61 线粒体膜通透性转换孔（Mitochondrial Permeability Transition Pore；MPTP）检测试剂盒 BB-48122 检测原理是利用荧光光漂白恢复（Fluorescence Recovery After Photobleaching，FRAP）技术进行检测。
首先通过被动运输加载 BBcellProbe® M61 探针，BBcellProbe® M61 探针是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，能够轻易穿透活细胞膜，被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性荧光分子，从而被滞留在细胞内，使胞质包括线粒体发出强绿色荧光。加入 M61 荧光探针的淬灭剂后，来自胞质的荧光被淬灭剂淬灭，仅留下线粒体内的荧光。作为对照，可将细胞加载 BBcellProbe® M61 和 M61 荧光探针淬灭剂的同时，对其用 Ca2+ 通透剂处理，从而使细胞加载更多的 Ca2+，引起线粒体通透性转换孔的激活从而使线粒体荧光淬灭。
BBcellProbeTM M61 最大激发波长 495nm，最大发射波长 515nm。实际检测时可以使用的激发波长为 488nm 左右，发射波长为 510～530nm。可以使用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测细胞内 mPTP 的变化。