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细胞培养上清中外泌体的提取方法
人阅读 发布时间：2022-01-12 16:22
外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体 (也称为多囊泡体 ) 的膜性小囊泡，直径约为 30-150nm，天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各种体液中，研究发现，Exosome 内含有与细胞来源相关的蛋白质、mRNA 和 microRNA，并且 exosome 能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能。
外泌体囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质，参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递，以调节不同范围的生物过程。外泌体囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识，显现了外泌体作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外，未修饰和工程化的外泌体囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。
外泌体（Exosomes）提取方法（细胞培养上清用）适用于从各种原代或传代培养细胞培养上清样品中提取总外泌体。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的外泌体可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。
传统的体外培养的细胞中分离和提取 exosome 的主要方法是超速离心法，这种方法缺点是耗时耗力，往往需要 30-70 个小时，每次最多只能处理 6 个样品，需要大量的起始材料，而且产量不高。通过自主开发的外泌体快速提取试剂盒系列产品，可以通过简单离心快速高效获得高纯度外泌体颗粒。本试剂盒提取的外泌体完好无缺，能用于各种功能研究、蛋白分析及 RNA 分析、电镜分析、NTA 粒径分析等下游实验应用。
一般巨噬细胞、淋巴细胞、造血细胞、胰腺癌细胞等分泌外泌体较多，其它细胞样本建议每个样培养基上清用量不少于 8ml。常规的细胞样本最佳培养上清上样量为 15-20ml 及以上，条件允许的情况下采用尽可能多的细胞培养上清。条件允许的情况下可以将细胞培养上清浓缩后再提取外泌体。在收获细胞时，应确定死亡细胞不超过 5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在外泌体的提取过程中会污染活细胞产生的外泌体。已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或 4℃ 保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。
2.纯度高，富集量大，应用范围广；
3.获取的 Exosome 结构和功能完整；
4.稳定性好，便于运输，便于保存。
外泌体囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质，参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递，以调节不同范围的生物过程。外泌体囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识，显现了外泌体作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外，未修饰和工程化的外泌体囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。
外泌体（Exosomes）提取方法（细胞培养上清用）适用于从各种原代或传代培养细胞培养上清样品中提取总外泌体。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的外泌体可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。
传统的体外培养的细胞中分离和提取 exosome 的主要方法是超速离心法，这种方法缺点是耗时耗力，往往需要 30-70 个小时，每次最多只能处理 6 个样品，需要大量的起始材料，而且产量不高。通过自主开发的外泌体快速提取试剂盒系列产品，可以通过简单离心快速高效获得高纯度外泌体颗粒。本试剂盒提取的外泌体完好无缺，能用于各种功能研究、蛋白分析及 RNA 分析、电镜分析、NTA 粒径分析等下游实验应用。
一般巨噬细胞、淋巴细胞、造血细胞、胰腺癌细胞等分泌外泌体较多，其它细胞样本建议每个样培养基上清用量不少于 8ml。常规的细胞样本最佳培养上清上样量为 15-20ml 及以上，条件允许的情况下采用尽可能多的细胞培养上清。条件允许的情况下可以将细胞培养上清浓缩后再提取外泌体。在收获细胞时，应确定死亡细胞不超过 5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在外泌体的提取过程中会污染活细胞产生的外泌体。已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或 4℃ 保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。
方法的优势：
1.使用方便，无需超速离心，省时省力；
2.纯度高，富集量大，应用范围广；
3.获取的 Exosome 结构和功能完整；
4.稳定性好，便于运输，便于保存。
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